INFOSTER.RU информационный журнал

Сигнализация StarlineАвтосигализация STARLINE A93

 

Автосигнализация StarLine A93 с двусторонним типом связи имеет возможность интеллектуального автозапуска двигателя.

 

Есть защита диалоговым кодом управления с ключами 128 битного шифрования, оберегающим от перехвата радиосигнала кодграбберами.

 

Благодаря узкополосному трансиверу автосигнализация чётко работает в экстремальных условиях городских радиопомех.

 

ЗАКАЗАТЬ


Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) - это изящный метод, имитирующий естественную репликацию ДНК и позволяющий обнаружить специфический фрагмент в присутствии миллионов других.

История открытия ПЦР.
1869г. И. Мишером была открыта ДНК.
1944г. ученые О. Эвери, К. Мак-Леода и М.Мак-Карти провели ряд экспериментов по трансформации бактерий
1949–1951 гг. «правила Чаргаффа» определение принципа комплементарности
1955г. А. Корнберг открыл фермент
ДНК-полимеразу
1971г. Клеппе и соавт. представили принципы использования ДНК-праймеров для получения новых копий ДНК.
1975г. Т. Брок и Х.Фриз выделена Taq-полимераза.

Изобретение ПЦР: Kary Mullis, 1983 г.

Одним из важнейших видов биополимеров являются нуклеиновые кислоты. Они в свою очередь подразделяются на 2 основных типа:

РНК(рибонуклеиновая кислота)-кодирует генетическую информацию.

ДНК(дезоксирибонуклеиновая кислота)-обеспечивает передачу и хранение генетической информации. Есть у всех живых организмов (исключая РНК-вирусы, у которых генетический материал представлен РНК)

Строение
ДНК

структура ДНК представляет собой чередование нуклеотидов, содержащих фосфатную группу, остаток дезоксирибозы и одно из четырех азотистых оснований: пуриновое – аденин (A) или гуанин (G), или пиримидиновое – цитозин (С) или тимин (Т)

молекула ДНК представляет собой две закрученные антипараллельные полинуклеотидные цепи

Этапы постановки ПЦР:

Подготовка пробы

биологического материала .

Экстракция ДНК из биопрепарата и удаление или нейтрализация посторонних примесей для получения препарата ДНК.

Амплификация.

В реакционную смесь вносят анализируемый образец ДНК è ферментативная наработка фрагментов ДНК. Если мы исследуем образец на РНК –вирусы(ВИЧ, Геп С) , то выделенную РНК необходимо перевести в ДНК-форму (обратная транскрипция).

Детекция.

Существуют различные методы регистрации для визуализации результатов амплификации: FLASH(по конечной точке),технология Real-time,электрофорез.

Компоненты реакционной смеси для ПЦР:

Праймеры –олигонуклеатиды размером от 15 до 30 нуклеотидов, соответствующие участкам ДНК-мишени. Они ограничивают область ДНК , которая будет многократно копироваться.

Taq-полимераза -фермент, обеспечивающий достраивание второй цепи ДНК согласно принципу комплементарности.

Смесь дезоксинуклеотидтрифосфатов (дНТФ)-строительный материал для синтеза второй цепи

Буфер-смесь катионов и анионов, обеспечивающая оптимальные условия для реакции, а также стабильное значение pH.

Анализируемый образец – подготовленный к внесению в реакционную смесь препарат, который может содержать искомую ДНК, например, ДНК микроорганизмов,служащую мишенью для амплификации. При отсутствии ДНК-мишени специфические ампликоны не образуются.

Внутренний контроль(ВК)-искусственная молекула ДНК, представляющая собой альтернативную матрицу для ПЦР и позволяющая контролировать эффективность амплификации в каждой конкретной пробирке.

ДНК-зонды-олигонуклеотиды небольшого размера, комплементарные ампликонам. Благодаря прикрепленым к ним флуоресцентным меткам, ДНК-зонды могут использоваться для детекции результатов ПЦР

Этапы амплификации:

Продукт ПЦР- двуцепочечный специфический фрагмент ДНК (ампликон)

Амплификация –увеличение количества ампликонов в ходе многократно(25-51) повторяющихся циклов.

Детекция флуоресценции в режиме

<реального времени>.

Объективность исследования

Возможность количественного анализа

Высокая скорость исследования

Минимальный риск контаминации

Высокая эффективность анализа

Автоматический учет результатов

Менее жесткие требования к организации ПЦР лаборатории.

Применение ПЦР:

клиническая медицина

диагностика инфекционных заболеваний

диагностика наследственных заболеваний

выявление мутаций

генотипирование

клеточные технологии

создание генетических паспортов

экология

мониторинг состояния окружающей среды

анализ продуктов питания

анализ (ГМО)

судебная медицина и криминалистика

идентификация личности

установление отцовства

фармакология, ветеринария, научные исследования (молекулярная биология, генетика)

Перспективные направления ПЦР-диагностики

мутации, обусловливающие наследственные заболевания;

полиморфизмы, ассоциированные с предрасположенностью к мультифакторным заболеваниям;

онкогенетика;

фармакогенетика;

HLA-типирование;

иммуногенетика;

нарушения метаболизма и т.д.

HLA (от англ. Human Leucocyte Antigens) – система генов тканевой совместимости человека

Ошибки в ПЦР-диагностике

Последствия ошибок

Ошибки забора

Неправильное хран./транспорт.

Контаминация

Потери НК

Ингибиторы

Погрешности детекции

Ошибки интерпретации

Ошибки преаналитического этапа

Место взятия биологического материала предполагаемая локализация инфекционного процесса (кровь, мокрота, соскоб и т.д.)

Правильность взятия биологического материала

должен содержать максимальную концентрацию искомых микроорганизмов, а также быть лишен нежелательных примесей, ингибирующих ПЦР (слизь, гной, кровь).

Обработка биологического материала

гепарин является мощным ингибитором ПЦР

Хранение биологического материала

от 2 до 8°С в течение 24-48 часов, для более длительного хранения необходимо замораживание, цельная кровь не подлежит замораживанию.

Ошибки аналитического этапа

Генетическая изменчивость микроорганизмов

Например, у 30% пациентов с установленным диагнозом «хламидиоз», обусловленным С.trachomatis, при проведении исследований методом ПЦР результат анализа был отрицательным при полном соблюдении технологии. Это обусловлено тем, что часть коммерческих тест-систем в качестве мишени использовали плазмиду патогена, тогда как патологический процесс был связан с бесплазмидными штаммами бактерий.

Ошибки постаналитического этапа

Ошибки интерпретации результатов ПЦР

-Не принятие во внимание особенностей персистенции и элиминации возбудителя.

ДНК микроорганизма может сохраняться в течение нескольких недель после его элиминации и не свидетельствует о жизнеспособности.

-Клиническая оценка положительного результата ПЦР, определение его прогностической значимости.

Отождествлении двух принципиально различных понятий – «инфицированность» и «инфекционный процесс».

- Неверная интерпретация результатов количественного ПЦР-анализа.

ДНК HBV в крови более 10 000 копий/мл (2000 ME/мл)

«Несовпадение» результатов ПЦР и ИФА

Различная чувствительность методов

Наличие «серологического окна» 90-95 % зараженных ВИЧ АТ обнаруживаются в течение 3-х месяцев после заражения, 5-9 % – через 6 месяцев,

0,5-1 % – более поздние сроки.

Иммуносупрессированные пациенты

Генетическая изменчивость микроорганизмов

Иммунологическая толерантность (влияние лекарственных средств)

«Несовпадение» результатов ПЦР и ИФА

Генетически обусловленная серонегативность (серонегативные спондилоартриты (ССА))

«Иммунологический след»

Родоспецифических тест-систем для ИФА С. pneumonia, C. pecorum, C. Рsitaci

Зависимость результатов анализа методом ПЦР от используемого материала. Материал для ПЦР должен быть получен из места предполагаемой локализации процесса хламидийный сальпингитèлапароскопия

ПЦР не позволяет установить стадию инфекционного процесса

Авидность – это прочность связи между антителом и антигеном, которая отражает сроки заражения и длительность инфекционного процесса.
индекс авидности (ИА) < 30-35% - свежая первичная инфекция;
ИА ≥40% анамнестические высокоавидные антитела;
ИА 31-39% поздняя стадия первичной инфекции или недавно перенесенной инфекции.

Секвенирование (от англ. sequence – последовательность) – определение нуклеотидной последовательности генома или его фрагмента организма.
Секвенирование всего генома раковых клеток необходимо для того, чтобы сложить целостную картину развития опухоли. Это позволит определить не только эффективность стандартной терапии, но и сформулировать направления генной терапии.

Прогноз погоды

Баннер

Новое на сайте